Vrijeme čitanja: 8 minute

Prvo hrvatsko istraživanje ljekovitih gljiva:
Testiranje Dr Myko San preparata

PRELIMINARNA TESTIRANJA ANTITUMORSKIH PREPARATA PODUZEĆA DR MYKO SAN – ZDRAVLJE IZ GLJIVA

Na Zavodu za molekularnu medicinu Instituta Ruđer Bošković u Zagrebu obavljena su preliminarna in vivo i in vitro testiranja antitumorskih preparata iz ljekovitih gljiva Lentifom i Lentram, odnosno nekih od njihovih osnovnih komponenti, kao i test toksičnosti Lentifoma i Lentrama, proizvoda poduzeća Dr Myko San – Zdravlje iz gljiva. Istraživanja su tokom 1999. i 2000. godine proveli prof. dr. sc. Mislav Jurin i mr.sc. Siniša Ivanković, uz tehničku suradnju gospođe Nevenke Hiršl. U ime poduzeća Dr Myko San – Zdravlje iz gljiva u suradnju je bio uključen dr. sc. Ivan Jakopović.

UČINAK LENTIFOMA I LENTRAMA NA KULTURE STANICA FIBROSARKOMA

U siječnju i veljači 2001. godine isti tim obavio je i nove in vitro pokuse, kojima se nastojalo utvrditi učinak koncentriranog oblika preparata Lentifom i Lentram na kulture stanica fibrosarkoma (FSar) i skvamoznog karcinoma (SCC VII). Pokazalo se da oba preparata imaju jaku citotoksičnost, tako da u koncentracijama od prvobitno primijenjenih 50% u odnosu na ukupnu količinu hranjivog medija za kultiviranje tumorskih stanica (5 ml), a zatim i u koncentracijama od 10% – dovode do potpune redukcije broja živih tumorskih stanica u kulturi! Unatoč određenih tehničkih problema, uspjeli smo snimiti rezultate pokusa s fibrosarkomom:

POKUSI IN VIVO

U ispitivanju duljine preživljavanja miševa nakon ubrizgavanja tumorskih stanica korišteni su ekstrakti nekih od osnovnih komponenti preparata poduzeća Dr Myko San – gljiva Lentinula edodes, Grifola frondosa i Coriolus versicolor, u koncentracijama u kojima se nalaze i u samim cjelovitim preparatima. Miševima soja C3H/HZgr ubrizgano je cca 5 x 10⁵ stanica vrlo agresivnih tumora – fibrosarkoma (FSar), odnosno skvamoznog karcinoma (SCCC VII). Kada su implantirani tumori narasli do promjera od prosječno 5mm, životinje su u trbušnu šupljinu dobivale dnevno po 1ml ekstrakta gljiva, u ukupnom trajanju od 15 dana. Zatim je mjereno trajanje preživljavanja svake od skupina, u usporedbi s kontrolnim skupinama koje nisu dobivale ekstrakte iz ljekovitih gljiva.

Najvažniji rezultati su sljedeći:

1. Zadnjeg dana praćenja u kontrolnoj skupini miševa sa fibrosarkomom bilo je još 20% preživjelih životinja, dok je u skupini koja je dobivala ekstrakt gljive shiitake Lentinula edodes preživjelih bilo 60%. Detaljniji prikaz na grafikonu 1:
2. Zadnjeg dana praćenja u kontrolnoj skupini miševa sa skvamoznim karcinomom nije više bilo preživjelih životinja, dok je u skupini koja je dobivala ekstrakt gljive Grifola frondosa preživjelih bilo 60%. Detaljniji prikaz na grafikonu 2:
3. Zadnjeg dana praćenja u kontrolnoj skupini miševa sa fibrosarkomom bilo je još 20% preživjelih životinja, dok je u skupini koja je dobivala ekstrakt gljive Coriolus versicolor preživjelih bilo 40%. Detaljniji prikaz na grafikonu 3:
4. Zadnjeg dana praćenja u kontrolnoj skupini miševa sa skvamoznim karcinomom nije više bilo preživjelih životinja, dok je u skupini koja je dobivala ekstrakt gljive Coriolus versicolor preživjelih bilo 40%. Detaljniji prikaz na grafikonu 4:

na vrh

POKUSI IN VITRO

Ispitivanja antitumorskih preparata i nekih od njihovih osnovnih komponenti provedena su i na kulturama stanica in vitro krajem siječnja i početkom veljače 2000. godine.

U prvom testiranju ispitivano je djelovanje različitih koncentracija ekstrakata gljiva Coriolus versicolor, Grifola frondosa i Lentinula edodes, proizvedenih u poduzeću Dr Myko San – Zdravlje iz gljiva, na kulture stanica dvaju vrlo malignih tumora – skvamoznog karcinoma (SCC VII) i fibrosarkoma (FSar), u usporedbi s kontrolnim kulturama stanica. Stanice skvamoznog karcinoma i fibrosarkoma, uzete iz stanične kulture, u koncentraciji od 2 x 10⁵ živih tumorskih stanica po mililitru, kultivirane su u inkubatoru 72 sata, uz dodatak od po 100µl ekstrakata navedenih gljiva po “bunariću”, ili bez dodavanja tih ekstrakata (kontrola), a zadnja 24 sata inkubacije u kulturama je bio prisutan radioaktivni timidin. Nakon završetka kultivacije mjeren je intenzitet radioaktivnosti ugrađenog timidina: što je manji bio broj otkucaja u minuti (CPM), to je veći udio uništenih tumorskih stanica u kulturi. Najznačajniji rezultati su sljedeći:

1. U odnosu na cca 13800 – 16500 CPM kod kontrolnih kultura, ekstrakt gljive Coriolus versicolor u najjačoj je koncentraciji broj CPM u kulturi stanica skvamoznog karcinoma smanjio na 522, a u kulturi stanica fibrosarkoma na samo 188.
2. U odnosu na gore navedeni broj CPM kod kontrolnih kultura, ekstrakt gljive Grifola frondosa u najjačoj je koncentraciji broj CPM u kulturi stanica skvamoznog karcinoma smanjio na 274, a srednja koncentracija toga ekstrakta smanjila je broj CPM u kulturi stanica fibrosarkoma na 423.
3. Posebno su zanimljivi rezultati testiranja ekstrakta gljive Lentinula edodes, čija je najslabija koncentracija broj CPM u kulturi stanica skvamoznog karcinoma, u odnosu na spomenuti broj CPM kod kontrolnih kultura, smanjila na 207, a najjača koncentracija toga ekstrakta smanjila je broj CPM u kulturi stanica fibrosarkoma na samo 170.

Detaljniji prikaz ovih rezultata u tabeli 1

21.1.2000.	SCC VII	FSar
PSK 25	862	9 359
PSK 50	834	1 404
PSK 100	522	188
GRIF 25	1 143	4 793
GRIF 50	1 102	423
GRIF 100	274	435
LENT 25	207	224
LENT 50	273	200
LENT 100	271	170
KONTROLA	16 459	14 160
KONTROLA	13 792	14 139
KONTROLA	14 376	14 989

U drugom testiranju ispitivano je djelovanje različitih koncentracija standardnog i koncentriranog ekstrakta gljiveCoriolus versicolor proizvedenog u poduzeću Dr Myko San, kao i različitih koncentracija preparata Lentifom i Lentram, standardnih proizvoda tog poduzeća, u njihovu standardnom i koncentriranom obliku, na kulture stanica triju vrlo malignih tumora – skvamoznog karcinoma (SCC VII), fibrosarkoma (FSar) i melanoma (B16F10), u usporedbi s kontrolnim kulturama stanica. Najznačajniji rezultati su sljedeći:

1. U ovom se testiranju pojavio jedan osobito “žilav” klon stanica skvamoznog karcinoma, čiji rast u kulturi stanica ekstrakti gljive Coriolus versicolor i Lentifomi Lentram nisu mogli inhibirati. Ipak, u odnosu na cca 2070-2890 CPM kod kontrolnih kultura ovoga karcinoma, koncentrirani oblik Lentifoma u najjačoj od 3 primijenjene koncentracije smanjio je broj CPM u kulturi stanica toga karcinoma na 407.
2. Kod fibrosarkoma su kontrolne kulture stanica imale broj CPM od cca 53900-61600. Standardni oblik Lentifoma je, u najjačoj od 3 primijenjene koncentracije, smanjio broj CPM u kulturi stanica fibrosarkoma na svega 90, a koncentrirani oblik Lentifoma u najjačoj koncentraciji na 233, a u srednjoj koncentraciji na 131 CPM. Slične rezultate dala je i primjena Lentrama: standardni je oblik u najjačoj koncentraciji smanjio broj CPM na 168, a koncentrirani oblik Lentrama je u najjačoj koncentraciji smanjio broj CPM u kulturi stanica fibrosarkoma na 127, a u srednjoj koncentraciji na 171 CPM.
3. U kulturama stanica melanoma kontrolni su uzorci imali broj CPM od cca 50140-52100.Standardni oblik Lentifoma je, u najjačoj od 3 različite koncentracije, smanjio broj CPM u kulturi stanica melanoma na 1808, a koncentrirani oblik Lentifoma je u srednjoj koncentraciji smanjio broj CPM na 3590. Lentram je u većini koncentracija standardnoga i koncentriranoga oblika bio manje efikasan, ali je koncentrirani oblik u najjačoj od 3 primijenjene koncentracije smanjio broj CPM u kulturi stanica melanoma na samo 263.
4. Kao dodatna kontrola u ovom su testiranju primijenjene i kulture normalnih stanica – fibroblasta, čiji su kontrolni uzorci imali broj CPM od cca 1460-2160. Izuzevši koncentrirani Lentifom u najjačoj koncentraciji (broj CPM bio je samo 260), te standardni Lentifom u najjačoj koncentraciji (broj CPM iznosio je 1612) – standardni i koncentrirani ekstrakt gljive Coriolus versicolor, kao i preparati Lentifom i Lentram u standardnom i koncentriranom obliku, u svim su primijenjenim koncentracijama umjereno ili snažno poticali rast normalnih fibroblasta.

Detaljniji prikaz svih rezultata nalazi se u tabeli 2

9.2.2000.	V79	SCC VII	FSar	B16 F10
PSK 25	7 069	3 851	14 297	38 235
PSK 12,5	3 41	3 027	52 338	48 307
PSK 6,25	2 772	2 686	60 085	49 096
PSK1 25	10 208	7 435	6 808	22 470
PSK1 12,5	7 884	5 418	20 265	34 463
PSK1 6,25	3 580	3 326	53 888	41 778
LF 25	1 612	3 222	90	1 808
LF 12,5	4 781	7 189	464	17 332
LF 6,25	5 466	7 478	5 185	35 479
LF1 25	260	467	233	25 119
LF1 12,5	2 340	3 217	131	3 590
LF1 6,25	5 580	6 377	1 596	17 391
LENT 25	11 777	17 740	168	13 525
LENT 12,5	11 685	15 678	7 764	37 068
LENT 6,25	6 420	7 451	28 823	40 188
LENT1 25	12 356	6 403	127	263
LENT1 12,5	8 879	16 923	171	24 352
LENT1 6,25	7 715	12 419	17 516	43 360
KONTROLA	2 158	2 889	61 619	52 078
KONTROLA	1 460	2 067	59 723	51 313
KONTROLA	1975	2 061	53 904	50 142

na vrh

TEST TOKSIČNOSTI

Prije ispitivanja učinka Lentifoma i Lentrama na Zavodu za molekularnu medicinu Instituta Ruđer Bošković u Zagrebu još 1999. godine ispitano je njihovo eventualno toksično djelovanje. Učinak svakoga preparata ispitivan je na skupini od po 10 miševa, podijeljenih u 3 podjednake podskupine. Te su podskupine u trajanju od 41 dana dobivale Lentifom odnosno Lentram u nerazrijeđenom obliku, razrijeđen s vodom u omjeru 1:5, te razrijeđen s vodom u omjeru 1:25. Miševi su u trajanju od 11 dana dnevno dobivali dozu od 0,5 ml preparata u trbušnu šupljinu (intraperitonealno), a tokom cijeloga pokusa pratilo se tjelesnu masu miševa, moguće nuspojave i preživljavanje.

Rezultat je sljedeći: Tjelesna masa miševa je u određenoj mjeri rasla ili padala, ili je ostajala ista. Sve su životinje preživjele 41 dan pokusa, a za cijelo to vrijeme nisu uočene nikakve nuspojave. Utvrđeno je, dakle, da ni Lentifom ni Lentram, bilo u razrijeđenom bilo u nerazrijeđenom obliku, nemaju toksičnog učinka.

Također, pročitajte više o zajedničkom projektu i objavljenom radu Instituta Ruđer Bošković i kompanije Dr Myko San “Utjecaj ekstrakata ljekovitih gljiva na mišje tumore“.

na vrh